仪器分析、检验仪器原理及维护 （掌握）
临床检验仪器的常用性能指标：灵敏性，误差，噪声，最小检测量，精确度，可靠性，重复性，分辨率，测量范围和示值范围，线性范围，响应时间，频率响应范围。
（熟悉）误差：两种表示方法。一是绝对误差，二是相对误差。
（熟悉）离心机的工作原理：
离心机就是利用离心机转子高速旋转产生的强大的离心力，迫使液体中的微粒克服扩散，加快沉降速度，把样品中具有不同沉降系数和浮力密度的物质分离开。
（熟悉）离心力：由于物体旋转而产生脱离旋转中心的力，也是物体作圆周运动所产生的向心力的反作用力。
（熟悉）相对离心力：通常颗粒在离心过程中的离心力是相对于颗粒本身所受的重力而言，因此把这种离心力叫做相对离心力。
（熟悉）离心机的分类：
按转速分 可分为低速、高速、超速离心机等；按用途可分为制备型、分析型和制备分析两用型；
（熟悉）离心机的主要技术参数：
3 、最大容量
离心机一次可分离样品的最大体积，通常表示为 m ×n。
（掌握）
差速离心法：
差速离心法又称为分步离心法。根据被分离物的沉降速度不同，采用不同的离心速度和时间进行分步离心的方法，称为差速离心法。该方法主要用于分离大小和密度差异较大的颗粒。
优点：操作简单，离心后用倾倒法即可将上清液与沉淀分开，并可使用容量较大的角式转子；分离时间短、重复性高；样品处理量大。
缺点：分辨率有限、分离效果差，沉淀系数在同一个数量级内的各种粒子不容易分开，不能一次得到纯颗粒；壁效应严重，特别是当颗粒很大或浓度很高时，在离心管一侧会出现沉淀，颗粒被挤压，离心力过大，离心时间过长会使颗粒变形、聚集而失活。（P24）
（掌握）
密度梯度离心法：
密度梯度离心法又称区带离心法，该方法主要用于沉降速度差别不大的微粒，将样品放在一定惰性梯度介质中进行离心沉淀或沉降平衡，在一定离心力下把颗粒分配到梯度液中某些特定位置上，形成不同区带的分离方法。
优点：具有很好的分辨率、分离效果好，可一次获得较纯的颗粒；适用范围广，既能分离沉淀系数差的颗粒，又能分离有一定浮力密度的颗粒；颗粒不会积压变形、能保持颗粒活性，并防止已形成的区带由于对流而引起混合。
缺点：离心时间较长；需要制备梯度液；操作严格、不易掌握。
（掌握）
光学显微镜的工作原理 ：
光学显微镜是利用光学原理，把人眼所不能分辨的微小物体放大成像，供人们提取物质微小结构信息的光学仪器。光学显微镜由两组会聚透镜组成光学折射成像系统。把焦距较短、靠近观察物、成实像的透镜组称为物镜；焦距较长，靠近眼睛、成虚像的透镜组称为目镜。被观察物体位于物镜的前方，被物镜做一级放大后成一倒立的实像，然后此实像再被目镜作第二次放大，得到最大放大效果的倒立的虚像，位于人眼的明视距离处。相对于物镜的成像条件及最后二次成像于观察者的明视距离等条件的满足，是通过仪器的机械调焦系统来实现的。
光学显微镜的最小分辨率是：0.2μm （熟悉）光学显微镜的基本结构：
光学系统：物镜、目镜、聚光镜、反光镜。
机械系统：聚光镜升降、调焦系统、载物台和物镜转换器等运动夹持部件以及底座、镜臂、镜筒等支持部件，一些特殊类型或高级显微镜还有一些附加装置。（P31）
（熟悉）
光学显微镜照明设置的几个主要部件：
光源：显微镜的光源有自然光源和电光源两大类。
滤光器：即滤光片，作用主要是改变入射光的光谱成分和光的强度，便于显微镜观察和显微摄影。最常使用的滤光片是有色玻璃滤光片。必须了解滤光片的光谱特性并正确选用，才能获得最佳效果。
聚光镜：对于大孔径物镜，不可能使用大尺寸光源，只有使用光学系统把光源的像放大，并把光源的聚焦于被观察物体附近，这个聚光系统就是聚光镜。
玻片：大多数生物显微镜的标本是夹在两片薄玻璃片中进行观测的。上面一片称盖玻片，下面一片称载玻片。由于它们处于观察光路之中，它们的光学性质对照明系统有较大的影响，因此应对玻片的参数做统一规定。（P34）
（熟悉）光学显微镜的机械系统包括底座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、调焦结构和聚光镜升降等，主要起固定、支撑、运动和调节等作用。（P34）
（掌握）
紫外- 可见分光光度计的工作原理：光照射到物质可发生折射、反射和透射，一部分光会被物质吸收。光被吸收后，其能量常以热的形式释放出来，这种能量一般觉察不到，但可以利用测量物质对某些波长光的吸收来了解物质的特性。不同的物质会吸收不同波长的光。改变入射光的波长，并依次记录物质对不同波长光的吸收程度，就得到该物质的吸收光谱。每一种物质都有其特定的吸收光谱，因此可根据物质的吸收光谱来分析物质的结构、含量和纯度，这就是吸收光谱分析法的理论基础。
（掌握）
光的吸收定律：
即郎伯-比尔定律，是比色分析的基本定律。表达了物质对单色光吸收程度与溶液浓度和液层厚度之间的函数关系。
浓度为 c、液层厚度为 b 的溶液，k 为比例常数。
A=kbc
当一束单色光照射吸收溶液时，其吸光度与液层厚度及溶液浓度的乘积成正比。此即朗伯-比尔定律。
（掌握）
紫外 — 可见分光光度计的基本结构：
光源、单色器、吸收池、检测器、信号显示系统。
光源：提供入射光的装置；常用的光源有钨灯或卤钨灯、氢灯或氘灯、汞灯等多种。
单色器：是将来自光源的复合光分解为单色光并分离出所需波段光速的装置，是分光光度计的关键部件； 吸收池：又称为比色皿、比色杯、样品池或液槽等，是用来盛放被测溶液的器件，同时也决定着透光液层厚度、特定波长光的透光度等多种参数，应具有良好的透光性和较强的耐腐蚀性。在可见光范围内，常用无色光学玻璃或塑料制作；在紫外区，需用能透紫外线的石英玻璃或蓝宝石制作。（P53）
检测器：把光信号转换为电信号的装置。又称为光电转换器。通常使用光电管、光电倍增管或光电二极管阵列作检测器。（P53）
信号显示系统：是把放大的信号以适当的方式显示或记录下来的装置。（P54）
（熟悉）血 细胞分析仪的定义 ：
血细胞分析仪（BCA）又称血细胞自动计数仪（ABCC）、血液自动分析仪（AHA）等，是对一定体积全血内血细胞数量和异质性进行自动分析的常规检验仪器。
其主要功能是血细胞计数、白细胞分类、血红蛋白测定、相关参数计算等。
（掌握）
电阻抗型血细胞分析仪的细胞计数原理：
血细胞与等渗的电解质溶液相比为不良导体，其电阻值比稀释液大。当血细胞通过检测器的微孔的孔径感受区时，其内外电极的恒流电路上的电阻值瞬间增大，产生电压脉冲信号。脉冲信号数等于通过的细胞数，脉冲信号幅度大小与细胞体积成正比。根据欧姆定律，在恒电流电路上，电压变化与电阻变化成正比，电阻值又同细胞体积成正比，血细胞体积越大，电压越高，产生信号的脉冲幅度就越大。各种大小不同的细胞产生的脉冲信号分别被送入仪器的检测通道，经计算机处理后，以体积直方图显示出特定细胞群中的细胞体积和细胞分布情况。最后得出白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、血小板（PLT）等相关参数。该原理也称 库尔特血细胞检测原理。
（掌握）
联合检测型血细胞分析仪的细胞计数原理：
以流式技术为基础再联合使用流式、激光、射频、电导、电阻抗、细胞化学染色等多项技术进行细胞分析，并综合分析检测数据，从而得出较为准确的“五分类”结果。其共有特点是均使用了流式细胞计数，形成流体动力聚焦的流式通道，使单细胞流在鞘液的包裹下通过流式通道，将重叠限制到最低限度。
（掌握）
网织红细胞计数分析基本原理：
采用激光流式细胞分析技术与细胞化学荧光染色技术联合对网织红细胞进行分析，即利用网织红细胞中残存的嗜碱性物质—RNA，在活体状态下与特殊荧光染料（新亚甲蓝、氧氮杂芑 750、碱性槐黄 O 等）结合，激光激发产生荧光，荧光强度与 RNA 含量成正比；用流式细胞技术检测单个的网织红细胞的大小和细胞内 RNA 含量及血红蛋白含量。由计算机数据处理系统综合分析检测数据，得出网织红计数及其他参数。（P68）
（掌握）
血细胞分析仪测定血红蛋白的原理：
除干式离心分层型、无创型外，各种 BCA 对血红蛋白测定都采用光电比色原理。血细胞悬液中加入溶血剂后，红细胞溶解释放出血红蛋白，后者与溶血剂中有关成分形成血红蛋白衍生物，进入血红蛋白测试系统。在特定波长（多为 530~550nm）下进行光电比色，吸光度值与所含血红蛋白含量成正比，经仪器计算显示出血红蛋白浓度。与不同型号BCA配套的溶血剂不同，形成血红蛋白衍生物也不同，吸收光谱也有差异，但最大吸收峰都接近 540nm，因为国际血液学标准化委员会（ICSH）推荐的氰化高铁（HiCN）法的最大吸收峰在 540nm，仪器血红蛋白的校正必须以 HiCN 值为标准。
（熟悉）血液凝固分析仪的定义：
血液凝固分析仪（ACA）是采用一定分析技术，对 血栓与止血有关成分进行自动检测分析的临床常规检验仪器。在血栓/止血实验室中最基本的设备就是血液凝固分析仪。（P74）
（熟悉）血凝仪的常用检测方法：
凝固法是血栓/止血实验中最基本、最常用的方法。
（熟悉）技术性能评价：ICSH 对血凝仪性能评价的标准如下：1. 精密度 2. 线性 3. 准确性 4. 携带污染率 5. 干扰6. 可比性分析 （掌握）
血液凝固分析仪的临床应用 半自动血凝仪以凝固法测定为主,检测项目较少,而全自动血凝仪可使用多种方法进行凝血、抗凝、纤维蛋白溶解系统功能、用药的监测等多个项目的测定。
1 、 凝血系统的检测常规筛选实验：
如 PT、APTT、TT 测定;单个凝血因子含量或活性的测定 2 、抗凝系统的检测抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）、蛋白 C（PC）、蛋白 S（PS）、活化蛋白抵抗（APCR）、狼疮抗凝物质（LAC）等测定。
3 、纤维蛋白溶解系统的检测血浆纤溶酶原（PLG）、α 2 -抗纤溶酶（a2-AP）、纤维蛋白降解产物（FDP）、D-二聚体（D-Dimer）等。
4 、临床用药的监测当临床应用普通肝素（UFH）、低分子肝素（LMWH）及口服抗凝剂如华法林时，常用血凝仪进行监测以保证用药安全。
（熟悉）血液黏度计的分类：
按工作原理，可分为 毛细管黏度计和旋转式黏度计。
（熟悉定义）
红细胞沉降率 ：是指红细胞在一定条件下沉降的速度，简称血沉。
（熟悉）自动血沉仪的工作原理：所有自动血沉仪的原理和方法都是建立在 魏氏法的基础上 （掌握）
影响红细胞沉降的因素：红细胞的大小和形态；红细胞的变形性；红细胞聚集性，红细胞间的相互作用；血细胞比容；血浆介质和沉降管的倾斜度等。
（熟悉）光源：采用 红外光源；
（掌握）
红细胞沉降曲线 ：分为红细胞不下沉的悬浮期、红细胞缗线状形成的聚集期、红细胞等快速下降的快速沉降期、红细胞开始积压的缓慢沉降期。
自动血沉分析仪的质量控制：
（熟悉）样本的采集与抗凝：
静脉采血要求在 30 秒内完成 1ml 左右的采血且不能淤血和溶血。
（熟悉）质控物的选择：质控物的质量是质控的关键，标准化方法要求使用新鲜人血，血沉值为 15-105mm，按参考方法进行校验，95%的差值应在 5mm 以下。一般采取低值、中值和高值三个新鲜血样，要求这三个血样的血沉值应为 1-99mm 之间。
（掌握）
尿液分析 临床意义 ：
是临床诊断泌尿系统疾病的重要措施之一，通过对尿液的物理学检查和化学检查，可观察尿液物理性状和化学成分的变化。在尿沉渣检查中能够看到的有形成分为红细胞、白细胞、上皮细胞、管型、巨噬细胞、肿瘤细胞、细菌、精子以及由尿液中沉析出来的各种结晶（包括药物结晶）等。这些检查资料对肾和尿路疾患的诊断、鉴别诊断以及疾病的严重程度和预后的判断，都有极重要的意义。
（熟悉）
尿液分析仪的分类：按工作方式分类：可分为湿式尿液分析仪和干式尿液分析仪。
按测试项目分类：可分为 8 项尿液分析仪、9 项尿液分析仪、10 项尿液分析仪、11 项尿液分析仪、12项尿液分析仪和 13 项尿液分析仪。检测项目包括尿蛋白、尿葡萄糖、尿 pH、尿酮体、尿胆红质、尿胆原、尿潜血、亚硝酸盐、尿白细胞、尿比重、维生素 C、尿液颜色和浊度。
按自动化程度分类：可分为半自动尿液分析仪和全自动尿液分析仪。
（熟悉）
试剂带的反应原理：
（1）pH 测定：采用 pH 指示剂原理（2）尿蛋白质测定：利用 pH 指示剂蛋白质误差的原理。（3）尿葡萄糖测定：当前有两种完全不同的检测尿糖的方法，一种是基于葡萄糖氧化酶法原理，能特异地检出尿中的葡萄糖：另一种是基于铜还原法的原理，能检测葡萄糖和其他还原性物质。（4）尿酮体测定：采用亚硝基铁氰化钠反应测量酮体。（5）尿隐血测定：利用游离血红蛋白、溶解红细胞或肌红蛋白中的血红素具有过氧化物酶样作用，能催化过氧化氢释放出新生态氧，使色原氧化而显色，其颜色深浅与血红蛋白含量有关。（6）尿胆红素测定：采用重氨反应法原理。（7）尿胆原测定：采用 Ehrlich 醛反应原理或重氮反应原理。（8）尿亚硝酸盐测定：尿亚硝酸盐试验的化学基础是利用某些细菌能将尿中硝酸盐还原成亚硝酸盐的特性。在酸性条件下，使亚硝酸盐与芳香胺结合形成重氮化合物，再与苯喹啉结合产生重氮色素，颜色变化与细菌数量不成比例，但阳性结果表明尿中细菌数量在 10 5 /ml 以上。
（9）尿白细胞测定：利用中性粒细胞的酯酶能水解吲哚酚生成吲哚酚和有机酸，吲哚酚可进一步氧化成靛蓝的原理；或吲哚酚和重氮盐反应，生成重氮色素而显色的原理进行测定，颜色深浅与粒细胞量的多少有关。（10）尿比重测定：基于某种预处理的多聚电解质在一定离子浓度溶液中 pKa 变化来测量比重。
（11）尿维生素 C 测定：采用磷钼酸缓冲液或甲基绿与尿中维生素 C 进行反应，形成钼蓝，颜色由蓝色变成紫色，颜色深浅与尿中维生素 C 含量有关。（12）尿液颜色测定：采用反射法，不同类型的仪器采用不同的波长对空白垫进行检测。（13）尿浊度测定：通过透光指数原理，采用尿液与蒸馏水的透射和折射光相比较，计算出尿液的浊度。（P95-96）
（掌握）
尿液分析仪的检测原理：
把试剂带浸入尿液以后，除了空白块外，其余的试剂块都因和尿液发生了化学反应而产生了颜色的变化，试剂块的颜色深浅与光的吸收和反射程度有关，颜色越深，相应某种成分浓度越高，吸收光量值越大，反射光量值越小：反之，反射率越大。因为颜色的深浅与光的反射率成反比关系，而颜色的深浅又与尿液中各种成分的浓度成比例关系，所以只要测得光的反射率及可以求得尿液中各种成分的浓度。（P97）
尿液分析仪一般采用双波长法测定试剂块的颜色变化。一种波长为测定波长，它
是被测试剂块的敏感特征波长；另一种为参比波长，是被测试剂块不敏感的波长，用于消除背景光和其他杂散光的影响。
（熟悉）尿液分析仪一-般由机械系统、光学检测系统、电路系统三部分组成。
（掌握）
尿液分析仪的使用注意事项：
1 、 保持仪器的清洁，才能维持良好的运行
2、保证使用干净的取样杯，使用新鲜的混合尿液，标本留取后，一般应在 2 小时内进行检验；
3、不同类型的尿液分析仪使用不同的试剂带，在试剂带从冷藏温度变成室温时，不要打开盛装试剂带的瓶盖。每次取用后应立即盖上瓶盖，防止试剂带受潮变质；
4、试剂带浸入尿样的时间为 2 秒，过多的尿液应用滤纸吸走，所有试剂块包括空白在内都要全部浸入尿液中；
5、仪器使用最佳温度应在 20-25℃，尿液标本和试剂带最好也在这个温度范围内；
6、在报告检测结果时，由于各类尿液分析仪设计的结果档次差异较大，不能单独以符号代码结果来解释，要结合半定量值进行分析，以免因定性结果的报告方式不够妥当，给临床解释带来混乱。（P100）
（熟悉）
尿液分析仪的质量控制：
检测前的质量控制：包括正确的尿液收集方法、有效的标本标记与识别、适宜的防腐剂或冷藏装置、在规定时间内完成检测等，同时应了解患者可能影响尿化学检测的进食和药物使用情况等； 检测中的质量控制：包括严格、规范、正确的实验操作和合理的应用尿液质控物来监控、判断尿液分析仪是否处于最佳或正常的工作状态。质控尿液可购买商品化产品，也可人工配制。在尿液分析仪全面鉴定和定期校准的基础上，每日对仪器和试剂带按规范化质控程序进行操作。每次使用“正常”或“异常”两种浓度的质控尿液。任何一个试剂模块的测定结果与质控尿液期望“靶值”允许有 1 个定性等级的差异，超过此范围或结果在“正常”和“异常”之间跳跃，均应视为失控。
检测后的质量控制：主要体现在对检验报告单的审核和签发。除了注意检验报告的文字书写或计算机录入有无错误外，更应分析检测结果之间的关联性，即尿液分析的结果与显微镜镜检结果的相互关系。另外，应注意维生素 C 含量对其他检测结果的影响，注意临床诊断和检验结果的符合性。（P101）
（熟悉）尿有形成分分析仪大致有两类， 一类是流式全自动尿有形成分分析仪，另一类是影像型尿有形成分分析仪。
（掌握）
流式全自动 尿液有形成分分析仪的工作原理：
流式全自动尿有形成分分析仪的测定是应用流式细胞术和电阻抗的原理进行的。一个尿液标本被稀释并经染色液染色后，靠液压作用通过鞘液流动池。反应样品从样品喷嘴出口进入鞘液流动室时，被一种无粒子颗粒的鞘液包围，使每个细胞以单个纵列的形成通过流动池的中心（竖直）轴线，在这里每个尿液细胞被氩激光光束照射。每个细胞有不同程度的荧光强度（FI），从染色尿液细胞发出的荧光，主要反映细胞的定量特性（如细胞膜、核膜、线粒体和核酸）、前向散射光强度（Fsc），它成比例地反映细胞的大小和电阻抗的大小（电阻抗电信号与细胞的体积成正比）。仪器将这种荧光、散射光等光信号转变成电信号，并对各种信号进行分析，最后得到每个尿液标本产生出的直方图和散射图。通过分析这些图形，即可区分每个细胞并得出有关细胞的形态。
（ 掌握）
基本结构：流式全自动尿有形成分分析仪包括光学检测系统、液流系统、电路系统和自动进样装置。
）
（熟悉）
自动生化分析仪器的分类：
根据仪器反应装置结构的不同，可分为连续流动式、离心式、分立式 （使用率最高）和干化学式。
（掌握）
分立式自动生化分析仪的 工作原理 ：
是按手工操作的方式编排程序，并以有序的机械操作代替手工操作，用加样探针将样品加入各自的反应杯中，试剂探针按一定时间自动定量加入试剂，经搅拌器充分混匀后，在一定条件下反应。反应杯同时作为比色杯进行比色测定。各环节用传送带连接，按顺序依次操作，故称为“顺序式”分析。（p112）
检测系统：
光源：
氙灯
（掌握）
后分光技术 优点：使用后分光技术，可以在同一体系中测定多种成分。如果比色池中有多种吸收特征不同的组成物质，当复色光通过后，各物质分别对各自的特征性光波产生吸收，之后再分成光谱对不同的波长进行测定，可以在同一体系中同时得到多组分结果，无需移动仪器的任何部分，稳定性好，速度快，噪声低，分析精确度和准确度高，故障少。
光栅使用寿命长，无需任何保养，采用 340nm 波长的酶类测定结果稳定可靠，可分为全息反射式光栅和蚀刻式凹面光栅，前者是在玻璃.上覆盖一种金属膜后制得，有一定相差，易被腐蚀；后者是将所选波长固定刻在凹面玻璃上，无相差，抗腐蚀，耐磨损，是目前最先进的全息光栅。
（熟悉）分立式自动生化分析仪的优点是样品在检测系统中是各自独立的，能够减小交叉污染。
（熟悉）自动生化分析仪的性能指标：检测准确度 （检测准确度包含正确度和精密度）自动化程度、分析效率、应用范围、其他性能。
检测准确度是自动生化仪最重要的性能指标 （掌握）
自动生化分析仪的分析方法 分为：
1. 终点分析法：
又称平衡法，是通过测定反应开始至反应达到平衡时的产物或底物浓度的总变化量来求出待测物浓度或活性的方法。
可分为①：一点法：指样品和试剂混合后，反应一定时间到达终点时，通过吸光度的检测计算待测物浓度。该法简便，但易受样品、试剂颜色、血清浊度及干扰物的影响。单试剂型的生化检测项目需选用一点法，如钙、磷、镁的测定
②两点法：常应用于具有双试剂的检测项目。加入样品后分别读取试剂 I、II 吸光度值，即样品空白值和实际呈色反应值，计算待测物浓度。该法可在一定程度上消除样品、试剂颜色、血清浊度及干扰物的影响。目前大多数生化检测项目都可使用双试剂，如血清总蛋白、白蛋白、总胆红素、结合胆红素、葡萄糖、总胆固醇、甘油三酯等的测定。
③固定时间法：是终点分析法的一种情况，可减少非特异性反应，指样品和试剂混合后分别读取延滞期后和反应一定时间后的吸光度，计算待测物浓度。如碱性苦味酸法测定肌酐，。
2. 连续监测法：
又称速率法，是通过连续测定酶促反应过程中某一反应产物或底物的吸光度，根据吸光度随时间的变化求出待测物浓度或活性的方法。主要适用于酶活性及其代谢产物的测定，可将多点测定结果连成线，自动选择线性反应期计算酶活性或浓度，使分析准确度和速度大大提高。
3. 免疫透射比浊法：用于测定产生抗原抗体特异性浊度反应的项目，在光源的光路方向测量透射光强度来测定物质浓度，常采用终点法，主要用于血清特种蛋白的测定，如载脂蛋白、微量蛋白、急性时相反应蛋白、免疫球蛋白以及某些药物监测等。
4. 双试剂法：
在反应过程中试剂分开配制和加入反应系统， 可消除干扰和非特异性反应，稳定试剂，使检测结果更准确。
（掌握）
自动生化分析仪的日常维护：
1、仪器工作环境：仪器室须有足够的空间，环境温度应恒定于 15~30℃之间，相对湿度应控制在 40%~85%之间；须防尘防腐蚀；：须防振防电磁干扰；自动生化分析仪应设置专用线路，防止电磁干扰及漂移对测定项目的影响。
2、流动比色池：必须每天清洗。如长时间未开机，开机后需以去离子水浸泡 24 小时后再用清洗液清洗。每测试完一个项目，必须彻底清洗。如果清洗不干净，测试结果会有误差，而且会影响仪器的自检，一旦自检不通过，仪器不能正常工作。
3、单色器和检测器：须注意防潮和绝缘，因此应及时更换仪器内部的干燥剂。
4、仪器管道系统：严格遵循操作手册中清洗维护程序，必须注意样品中不能混有纤维蛋白、灰尘等不溶性物质，以免管道堵塞。
5、日常维护与保养：严格按照操作手册，并根据实际使用情况，进行仪器日维护、周维护、月维护、不定期维护等。
（熟悉）电化学分析法的定义：
将被测物质的 浓度转变成电学参数进行测量的方法。
（熟悉）电解质分析仪的参比电极一般是 银/ 氯化银电极。
（熟悉）血气分析仪：
血气分析仪是利用电极对人体血液中的酸碱度（pH 值）、二氧化碳分压（PCO2）和氧分压（PO2）进行测定的仪器。
（熟悉）一般的血气分析仪使用四支电极，分别是 pH 、PCO2 、PO2 和 电极和 pH参比电极。
2、PCO2 电极：
PCO2 电极是一个 气敏电极 3、PO2 电极：
PO2 电极是一种 Clark 电极，属于气敏氧电极，也是极谱电极。。
（掌握哪两类）目前微生物鉴定的自动化系统大致分为 2 类：一类是 自动血培养检测和分析系统，另一类是自动微生物鉴定及药敏分析系统。
（熟悉）自动血培养系统的工作原理 ：
自动血培养系统主要由 培养系统和检测系统组成。
（掌握）
微生物自动鉴定及药敏分析系统的工作原理：
采用微生物数码鉴定原理，数码鉴定是指通过数学的编码技术将细菌的生化反应模式转换成数学模式，给每种细菌的反应模式赋予一组数码，建立数据库或编成检索本。通过对未知菌进行有关生化试验并将生化反应结果转换成数字（编码），查阅检索本或数据库，得到细菌名称。其基本原理是计算并比较数据库内每个细菌条目对系统中每个生化反应出现的频率总和。
（掌握原理）
药敏测试板：
药敏测试板也分为 常规测试板和快速荧光测试板两种。
常规测试板的检测原理为比浊法，如 Vitek 系统，在含有抗菌药物的培养基中，浊度的增加提示细菌生长，根据判断标准解释敏感或耐药； 快速荧光测试板的检测原理为荧光法，如 Sensititre 系统，在每一反应孔内参与荧光底物，若细菌生长，表面特异酶系统水解荧光底物，激发荧光，反之无荧光。以最低药物浓度仍无荧光产生的浓度为最低抑菌浓度（MIC）。
（掌握）
酶免疫分析仪的分类：
酶免疫分析技术 EIA 分类：可分为非均相（或异相）酶免疫测定和均相酶免疫测定两种。
均相酶免疫分析法：
以激素、药物等小分子抗原或半抗原为主，测定过程中无需分离结合的和游离的酶标记物，实验在液相中进行，可直接用自动生化分析仪进行测定。均相酶免疫分析有酶扩大免疫测定技术和克隆酶供体免疫测定两种方法。
非均相酶免疫分析法：非均相酶免疫分析法是在抗原抗体反应达平衡后，将游离的与抗原或抗体结合的酶标记物加以分离，再通过底物显色进行测定（P154）根据试验中是否使用固相支持物作为吸附免疫试剂的载体，又分为固相酶免疫法和液相酶免疫法两种，以前者最为常用，即酶联免疫吸附测定（ELISA）。ELISA 是临床上最常用的免疫分析方法，目前临床常用的酶免疫分析仪都是基于 ELISA 技术。（p154）
微孔板式 ELISA 使用的载体为 96 孔板。
（掌握）
酶标仪与普通光电比色计的不同之处：
1. 酶标仪比色液的容器不是比色皿，而是塑料微孔板；2.光束进入方式不同，酶标仪以垂直光束通过微孔板中的待测液。3.结果表示方法不同，酶标仪是用 OD 值，比色计是用吸光度 A,
（掌握）
酶免疫分析仪的性能评价：
1、滤光片波长精度检查及其峰值测定：用高精度紫外可见分光光度计（波长精度±0.3nm）对不同波长的滤光片进行光谱扫描，检测值与标定值之差即为滤光片波长精度，其差值越接近 0 且峰值越大表示滤光片质量越好； 2、灵敏度和准确度：灵敏度：其吸光度应≥0.01A；准确度：其吸光度应在 0.4A 左右； 3、通道差与孔间差检测：通道差检测：连续测三次，观察其不同通道之间测量结果的一致性，可用极差值来表示其通道差。孔间差的测量：选择同一厂家、同一批号酶标板条（8 条共 96 孔）分别加入 200μl甲基橙溶液（吸光度调至 0.065-0.070A），先后置于同一通道，蒸馏水调零，采用双波长检测，其误差大小用±1、96s 衡量； 4、零点漂移：取 8 只小孔杯，置于 8 个通道的相应位置，加入 200μl 蒸馏水并调零，采用双波长或单波长（490nm）每隔 30 分钟测定一次，观察 8 个通道 4 小时内的吸光度变化，其与零点的差值即称为零点飘移。观察各个通道 4 小时内的吸光度变化； 5、精密度评价：每个通道 3 只小杯，分别加入 200μl 高、中、低三种不同浓度的甲基橙溶液，蒸馏水调零，采用双波长作双份平等测定，每日测 2 次，连续测定 20 天。分别计算其批内精密度、日内批间精密度、日间精密度和总精密度及相应的变异系数 6、线性测定：采用双波长平行检测 8 次，求其均值。计算回归方程、相关系数 r 及标准评估误差 S y ， x ，并用±1、96S y ， x 表示样品的 95%测量范围； 7、双波长评估：取同一厂家、同一批号酶标板条进行检测，计算单波长和双波长测定结果的均值、离散度，比较各组之间是否有统计学差异以考察双波长清除干扰因素的效果。（P156）
（熟悉）免疫比浊分析仪方法分类：临床上如 测定微量蛋白（如 Ig 等）的自动化检测方法主要 为免疫比浊法。根据检测原理的不同，又分为 透射比浊法（包括浊度测定法和胶乳浊度测定法）和 散射比浊法（包括终点法和速率法）。（p161）
（掌握）
时间分辨荧光免疫检测 原理：用镧系三价稀土离子及其螯合物（如 Eu3+螯合物）作为示踪物标记抗体、抗原、核酸探针等物质。当免疫反应发生后，根据稀土离子螯合物的荧光光谱的特点（特异性强、巨大 Stokes 位移、荧光寿命长），用时间分辨荧光分析仪延缓测量时间，排除标本中非特异性荧光的干扰，所得信号完全是稀土元素螯合物发射的特异荧光，测定免疫反应最后产物的特异荧光信号。根据荧光强度判断反应体系中分析物的浓度，达到定量分析的目的。（P163）
特点：特异性强、敏感度高、标记物稳定、荧光信号强。时间分辨荧光免疫检测动态范围宽，可达 4~5个数量级；标记物制备简单，稳定性好，有效使用时间长，多数可达 6 个月；标记蛋白时反应条件温和，免疫活性很少受损；测量快速，每秒钟测一个样品；易于自动化；已开发出性能优良的数据处理软件，以及多标记物的使用等都是其突出的特点。
用途：目前时间分辨荧光免疫分析仪已广泛用于蛋白质和多肽激素、半抗原、病原体抗原/抗体、肿瘤标志物、干血斑样品、核酸等的分析，并可用于测定天然杀伤细胞的活力。（P164）
（熟悉）POCT 的概念：
即时检验 POCT 也称床边检验，，指在患者身边，由 非检验专业人员利用便携式仪器快速分析患者标本并准确获取结果的分析技术，或者说测试不在主实验室而在一个可移动的系统内进行。
“POCT ”的组成应包括：地点、时间、保健、照料、检验、试验等方面 （掌握）
即时检验仪器的特点：
①仪器小型化，便于携带；②操作简单化，一般 3~4 个步骤即可完成检测；③缩短检验周期，报告即时；④能获得权威机构的质量认证；⑤仪器和配套试剂中应配有质控品，可监控仪器和试剂的工作状态；⑥仪器检验项目具备临床价值和社会学意义；⑦仪器的检测费用合理；⑧仪器试剂的应用不会造成对患者和工作人员的健康损害或对环境的污染等。
（熟悉）POCT 快速血糖测定仪的原理：目前快速检测血糖仪多采用 葡萄糖脱氢酶 法，根据酶电极的响应电流与被测血样中的葡萄糖浓度呈现线性关系来计算血标本中的葡萄糖浓度值。当被测血样滴在电极的测试区后，由于电极施加有一定的恒定电压，电极上固定的酶与血液中的葡萄糖发生酶反应，血糖仪显示葡萄糖浓度值。（P174）
（掌握）PCR 技术的原理：
PCR 技术的基本原理类似于 DNA 的天然复制过程，其特异性依赖于靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR 由 变性- 退火- 延伸三个基本反应步骤构成。
1 、DNA 变性：双链 DNA 加热到变性温度（93℃左右）并保温一定时间后，解开螺旋成为两条 DNA 单链，均可作为扩增的模板； 2 、板 模板 DNA 与引物的退火（复性）：经加热变性成单链的模板 DNA 在温度降至退火温度（55℃左右）后复性。由于引物长度远小于模板，而且摩尔浓度高，因此在退火温度下引物更容易按碱基序列互补配对原则结合到模板链上； 3 、引物的延伸：与 DNA 模板结合的引物在 DNA 聚合酶的作用下，以 dNTP 为反应原料，靶序列为模板，在 Mg2+和合适 pH 缓冲液存在条件下，按碱基配对原则与半保留复制原理，合成一条新的与模板 DNA 链互补的新链。上述三个步骤称为一个循环，约需 2-4 分钟，每一循环新合成的 DNA 片断继续作为下一轮反应的模板，经多次循环（25-40 次），约 1-3 小时，即可将待扩增的 DNA 片断迅速扩增至上千万倍。（P181）
(熟悉）
定量 PCR 仪通常由两部分组成，即 PCR 系统和荧光检测系统。荧光检测系统主要包括 激发光源和检测器，现在的主流是 多色多通道检测，激发通道越多，适用的荧光素种类越多，仪器适用范围就越宽。
（熟悉）
目前 DNA 测序的工作原理主要利用 Sanger 双脱氧链末端终止法或 Maxam —Gilbert 化学降解法 （熟悉）多色荧光标记法：多色荧光标记法的荧光染料掺入方式有两种。
第一种方式是将荧光染料预先标记在测序反应所用引物的 5， 端，称为荧光标记引物法。
第二种掺入方式是将荧光染料标记在作为终止底物的双脱氧单核苷酸上，称为荧光标记终止底物法。
（熟悉）目前使用的全自动 DNA 测序仪都是通过 凝胶电泳技术进行 DNA 片段的分离。
（掌握）
流式细胞仪（FCM ）的分析原理：
将特异荧光染料染色的单细胞悬液放入样品管，在气体压力作用下，悬浮在样品管中的单细胞经管道进入 FCM 的流动室，沿流动室的轴心向下流动形成样品流。流动室轴心至外壁的鞘液也向下流动，形成包绕样品流的鞘液流。鞘液流和样品流在喷嘴附近组成一个圆柱流束，自喷嘴的圆形孔喷出，与水平方向的激光束垂直相交，相交点称为测量区。染色的细胞受激光照射后发出荧光，同时产生光散射。这些信号分别被光电倍增管和光电二极管接收，并转换为电子信号，再经过模数转换器输入计算机。计算机通过相应的软件储存、计算、分析这些数字化信息，就可得到细胞的大小、核酸含量、酶和抗原的性质等信息。
（掌握）
流式细胞仪（FCM ）的分选原理：
如果在压电晶体上加上频率为 30kHz 的信号，就会使其产生同频率的机械振动，流动室也随之振动，于是通过测量区的液柱断裂成一连串均匀的液滴。由于各类细胞的特性信息在细胞形成液滴以前在测量区已被测定，并储存在计算机中，因此，当要分选某类细胞时，FCM就将在这类细胞形成液滴时给含有这类细胞的液滴充以特定的电荷，而不符合分选条件的含细胞液滴和不含细胞的空白液滴不被充电，即不带电荷。带有电荷的液滴向下落入偏转板间的静电场时，依所带电荷的不同分别向左偏转或向右偏转，落入指定的收集器内。不带电的液滴不发生偏转，垂直落入废液槽中被排出，从而达到细胞分类收集的目的，分选出的细胞可以进一步分析、培养和研究。（P199）
（熟悉）电泳：
电泳（EP）指带电荷的溶质或粒子在电场中向着与其本身所带电荷相反的电极移动的现象。
（熟悉）
电泳的基本原理：
物质分子在正常情况下一般不带电，即所带正负电荷量相等，故不显示带电性。但是在一定的物理作用或化学反应条件下，某些物质分子会成为带电的离子（或粒子），不同的物质，由于其带电性质、颗粒性状和大小不同，他们在一定的电场中移动的方向和速度也不同，因此就可以将他们分离。
（掌握）
影响电泳的外界因素：
1、电场强度
2、溶液的 pH 值
3、溶液的离子强度
4、电渗作用
5、粒子的迁移率
6、吸附作用。
（掌握）
免疫电泳技术的两大优点：一是加快了沉淀反应的速度；二是将某些蛋白组分根据其带电荷的不同而分开，再与抗体起反应，从而使此方法更为微量化、多样化。
（掌握）
免疫电泳可用于的研究：抗原和抗体的相对应性，测定样品的各成分及他们的电泳迁移率，根据蛋白质的电泳迁移率，免疫特性及其他特性，可以确定该复合物中某些蛋白质，鉴定抗原或抗体的纯度。
（P217）
毛细管电泳：毛细管的内径是 20-100μm。（P220）
（掌握）
电泳仪的临床应用：血清蛋白电泳、尿蛋白电泳、血红蛋白及糖化血红蛋白电泳、免疫固定电泳、同工酶电泳、脂蛋白电泳以及高效毛细管电泳。（P226）
（熟悉）色谱法的基本原理：
色谱分离中的两相是指系统具有一个有大比表面积的 固定相（可以是固体或以某种方式固定了的液体）和一个能携带待分离混合物流过固定相的所谓 流动相（可以是气体或液体）。
（熟悉）色谱仪的分类：目前比较成熟的色谱仪主要是 气相色谱仪（GC ）和高效液相色谱仪（HPLC）
）两大类。
（熟悉）固定相：整个气相色谱系统的核心是 分析柱 （掌握）
生物安全柜 基本工作原理：主要是将柜内空气向外抽吸，使柜内保持负压状态，安全柜内的气体不能外泄从而保护工作人员。外界空气经高效空气过滤器过滤后进入安全柜内，以避免处理样品被污染；同时，柜内的空气也需经过高效空气过滤器过滤后再排放到大气中以保护环境。
（熟悉）
根据气流及隔离屏障设计结构，将生物安全柜分为Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ级。
1、Ⅰ级生物安全柜 是指用于保护操作人员与环境安全，而不保护样品安全的通风安全柜。
2、Ⅱ级生物安全柜 是指用于保护操作人员，环境，以及样品安全的通风安全柜，也是临床生物防护中应用最广泛的一类生物安全柜。
3、Ⅲ级生物安全柜 是具有完全密闭，不漏气结构的通风安全柜。工作空间内为经高效空气过滤器净化的无涡流的单向流空气。
（熟悉下表）：
（掌握）
生物安全柜内操作的注意事项：
1、个人防护，在使用安全柜时必须穿防护服，戴防护手套；最好戴口罩和帽子，根据需要戴防护眼罩或面罩； 2、安全柜内物品摆放原则①柜内放置的仪器和材料等物品保持最低数量②按照从清洁区到污染区的原则摆放③所有物品尽可能放在工作台中后部，前玻璃门进气口不能被纸、设备或其他东西阻挡 ④盛放废弃物及污物的容器应摆放在柜内污染区； 3、紫外灯的使用①每周对紫外灯进行清洁，除去可能影响消毒效果的灰尘和污垢②每次生物安全柜的认证要检查紫外灯的亮度，以确保适度的光发射量； 4、尽量避免使用明火，明火可造成生物安全柜内的气流紊乱、干扰气流模式，并且可能破坏高效空气过滤器； 5、操作宜缓慢⑤在安全柜内进行操作时手臂应缓慢移动②手臂不能频繁进出安全柜③操作完毕后，应将手臂从柜内缓慢抽出，避免将柜内污染空气带出④操作者背后其他人员的活动量要达到最小，以避免影响正常的气流； 6、柜内移动物品时应尽量避免交叉感染柜内有两种及以上物品需要移动时，需按照低污染物品向高污染物品移动的原则； 7、避免振动离心机等仪器造成的振动会将积留在滤膜上的颗粒物质抖落，导致柜内清洁度降低，仪器散热片排风口气流还可能影响柜内的正常气流方向，所以应避免此类仪器放入安全柜； 8、操作结束后应选用合适的消毒剂清洁安全柜内表面 9、安全柜只有在工作正常时才能使用，柜子的风扇在工作开始前和工作完成后要再各运行 5 分钟。
（熟悉）培养箱的定义 ：
培养箱是进行组织、细胞、细菌培养的一种必备仪器，它通过对周围环境条件的控制，制造出一个能使细菌、细胞更好地生长的环境，是现代大中型医院进行日常工作和科学研究必不可少的重要设备。
（ 熟悉）
细胞培养：是指从体内组织取出细胞，在体外模拟体内生理环境下，使其生长繁殖，并维持其结构和功能的一种体外培养技术。
（熟悉）细胞培养对生长环境要求如下：1 无菌环境 2 恒定的温度 36.5 ℃±0 、5 ℃；3 气体环境 4 细胞培养基。
（熟悉）多数细胞培养箱的二氧化碳气体范围为 0-20%
（熟悉）实验室自动化系统的分类：1 实验室模块自动化系统、2 全实验自动化。
（熟悉）实验室自动化系统的基本组成包括：标本传送系统，标本处理系统，自动化分析系统，分析后输出系统和分析测试过程控制系统。
（熟悉）离心单元在全自动生化分析仪中为独立单元
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